基本信息：

题目：Transformable Nanoparticle-Enabled Synergistic Elicitation and Promotion of Immunogenic Cell Death for Triple Negative Breast Cancer Immunotherapy
期刊：Adv. Funct. Mater. (IF: 15.621)
Elabscience产品：Human HMGB-1(High mobility group protein B1) ELISA Kit (货号：E-EL-H1554c)
物种：Human
应用：ELISA

文章摘要：
虽然以顺铂为基础的新辅助化疗是一种治疗三阴性乳腺癌(TNBC)的有效方法，但是往往预后较差，存活率未有明显提高。在本文中，作者报道了一种以诱导和促进免疫原性细胞死亡(ICD)反应为前提的TNBC协同免疫治疗方法，该方法通过可变化的纳米颗粒激活的方法来同时传输顺铂、adjudin和WKYMVm。纳米颗粒可以依次应答基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、pH、谷胱甘肽(GSH)，通过结构转化来实现最优尺寸变化、高效药物传送和良好释放控制的优点。顺铂和adjudin协同放大活性氧（ROS）级联反应，最终增加过氧化氢和下游高毒性ROS的形成（如·OH），通过内质网应激、凋亡细胞死亡和自噬机制诱导ICD反应。后WKYMVm通过激活甲酰肽受体1，在树突状细胞和濒死癌细胞之间建立稳定的相互作用，进一步促进anti-TNBC免疫。因此，该纳米颗粒具有显著的原发性肿瘤消退和肺转移抑制作用，并具有显著的生存优势，增强了先天和适应性anti-TNBC免疫。

实验思路：
纳米微粒结构转换和协同免疫治疗机制的转换示意图
a) 2-(Nap)-FFKPt-2TPA-ADDPLGVRGGGG和2-(Nap)-FFKPt-2TPA-ADDGGGPLGVRG-WKYMVm-mPEG1000可以在pH=7.4的PBS中自发组装成粒径小于100 nm的球形纳米微粒（NPs）(2-NPs和3-NPs）。2-NPs和3-NPs能被肿瘤中过表达的基质金属蛋白酶-2（MMP-2）诱发，转化为杆状NPs（2-NFs和3-NFs），2-NFs 和3-NFs不断转化为长度> 5µm的纳米纤维，并伴随顺铂（Pt）和 Adjudin（ADD）的稳定释放。

b) 左图，杆状NPs通过胞吞作用被细胞内化，胞质中的谷胱甘肽和弱酸环境在诱发Pt和ADD的快速释放的同时致使杆状NPs转化成纳米纤维。释放的母源药物能协同放大活性氧（ROS）级联反应，最终导致过氧化氢和下游OH-等高毒性活性氧的形成的增加，从而通过内质网应激、凋亡细胞死亡和自噬等机制，诱导以免疫原性细胞死亡（ICD）为前兆的抗三阴性乳腺癌（anti-TNBC）免疫反应。形成的纳米纤维还可以通过物理诱导，促进ROS的产生和凋亡细胞自噬。

实验设计：
CRT表达及HMGB-1释放实验:
实验中为了观察HMGB-1的释放情况，用不同培养基（含有Pt、ADD、Pt + ADD、1-NPs、Blank-NFs、2-NPs的新鲜培养基（用MMP-2预处理8 h））培养4T1细胞24小时，然后分别收集细胞上清液，用ELISA定量分析HMGB-1浓度，并进行western blot实验，进一步验证纳米微粒的注入是否引起TNBC肿瘤细胞发生ICD反应。

实验结果：
1.NBC中ICD反应的纳米激发

2.通过ICD作用增强Anti-TNBC免疫
ATP分泌，CRT表达和HMGB-1释放是肿瘤周围聚集DCs必不可少的条件。树突状细胞（DCs）吞噬肿瘤相关抗原，并分别与树突状细胞表面的P2RX7、CD91、TLR-4结合，使抗原有效呈递至T细胞。此外，化疗诱导的抗肿瘤免疫，需要FPR-1结合在DCs表面，使DCs接近濒死的肿瘤细胞，从而建立稳定的接触。WKYMVm （Wpeptide， Wpeptide）是一种FPR-1激动剂，已被广泛用作免疫佐剂，通过增加趋化性、产生超氧化物和分泌细胞因子来诱导抗肿瘤免疫。
ICD过程中，CRT、HMGB-1分别与DCs表面的CD91、toll样受体4 （TLR-4）结合，吞噬肿瘤抗原，使肿瘤抗原得到最佳表达。IHC数据显示，3-NPs诱导CD91和TLR-4的表达最为丰富，表明其对先天免疫有一定影响。此外，CRT表达和HMGB-1释放在3-NPs的作用下进一步改善。尽管对DCs的聚集没有影响，但FPR-1和annexin-1之间的相互作用通过促DCs接近死亡细胞，在一定程度上促进了ICD反应的发生。

文章小结：
作者提出了一种可转化的纳米颗粒激活的方法来协同诱导和促进ICD免疫反应，最终实现有效抗肿瘤和抗转移的TNBC治疗。这一策略可激发强烈的肿瘤特异性免疫反应，其特点是在肿瘤床内积累免疫效应细胞，调节与肿瘤生长和转移相关的免疫抑制微环境。3-NPs对原位4T1肿瘤模型的治疗效果最好，抑制率最高达93.1%，总体存活率提高约2.7倍。该结论可通过接种疫苗、局部治疗或全身给药等方式应用于临床实践，并可与PD-L1抑制剂等ICIs治疗相结合，也可应用于其他癌症的治疗。

产品信息：

货号：E-EL-H1554c
产品名称：Human HMGB-1(High mobility group protein B1) ELISA Kit人高迁移率族蛋白B1(HMGB-1)酶联免疫吸附测定试剂盒