PMSF Protease Inhibitor

产品简介

该试剂用于ELISA实验中细胞提取/细胞裂解液/组织匀浆样本收集时抑制破碎细胞释放的蛋白酶活性。

保存

存放于2-8℃，可稳定保存6个月。

使用方法

组织匀浆：

1. 用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除表面残留血液或其他杂质，称重后将组织处理成尽可能小的碎块。

2. 预先在预冷的PBS中加入适量的蛋白酶抑制剂（使抑制剂的有效浓度为17-174μg/mL），然后将剪碎的组织与对应体积的PBS(推荐一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。)加入玻璃匀浆器中，在冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行反复冻融或超声破碎。

3. 最后，将匀浆液吸入离心管中，于2-8℃，5000×g离心5-10分钟，收集上清，立即用于ELISA实验或分装保存于-20℃/-80℃，使用前避免反复冻融。

细胞提取/细胞裂解液

1. 吸出培养板中的培养基，用胰蛋白酶（E-EL-SR001）消化细胞，制备成细胞悬浮液；悬浮细胞忽略此操作。

2. 将细胞悬浮液收集到离心管中，以1000×g在2-8℃离心5分钟后，吸去培养基，用预冷的PBS洗涤细胞3次。

3. 加入适量的预冷PBS(在使用前加入蛋白酶抑制剂，有效浓度为17-174μg/mL)重悬细胞。建议：6孔培养板（约1×10⁶）中，每孔加入150-250μL预冷PBS重悬细胞。

4. 将重悬细胞在-20℃/-80℃和室温条件下反复冻融数次，直至细胞完全裂解。或使用超声波细胞破碎器超声处理细胞悬浮液来裂解细胞。