Western Blot Stripping Buffer (Neutral)

产品简介

Western一抗二抗去除液（Stripping buffer），用于Western Blot中已转移了蛋白的膜的重新利用。在已完成一次一抗二抗结合和后续的ECL曝光后，如还需用此膜的样本进行一些内参蛋白或其他蛋白的验证，可以使用此产品对膜上已结合的一抗二抗进行充分洗脱。确保之前的一抗信号被清除后，可以对膜进行内参抗体或者其他抗体的再次孵育，从而进行二次验证。节省了再次配制SDS-PAGE凝胶及转膜时间，同时也节约了实验的样本。使用本试剂只需要30 min即可实现蛋白膜的重复利用。可消除因重新上样带来的误差，使实验间的可比性更强。

产品组成

实验操作指南步骤

1. 完成第一次Western Blot化学发光后，将PVDF膜浸泡于TBST缓冲液中，清洗4次，5 min/次。

2. 将PVDF膜置于适量Western一抗二抗去除液中，确保膜被去除液完全覆盖，室温震荡孵育30min。

3. 弃Western一抗二抗去除液，TBST缓冲液中清洗4次，5 min/次。

4.（选做）

  a. 为检验原始的一抗二抗信息是否已经清除，PVDF膜可进行封闭后再次加入二抗，并且用ECL再次曝光，观察显示的原始信号情况。

  b. 若原始一抗二抗信号已清除干净，用TBST缓冲液清洗PVDF膜4次，5 min/次。从封闭步骤开始新的抗体的验证。

  c. 若原始信号未清除干净，可适当的延长步骤“2”中的洗脱时间，再次进行后续的步骤。

5. 按照Western Blot实验操作流程从封闭步骤开始新抗体的验证。

保存条件

2~8°C 保存，保质期12个月

注意事项

1. 用本品浸洗PVDF膜时会出现膜变透明，属正常现象，洗脱完毕后用TBST冲洗PVDF膜后恢复原状。

2. 为取得最佳效果，本一抗二抗去除液产品推荐使用PVDF膜。

3. 本产品适用于ECL或类似的化学发光试剂进行的Western Blot检测，使用非化学发光试剂进行的Western Blot检测，如DAB等，不适用本试剂。

4. 使用Western一抗二抗去除液多次重复使用同一张膜，可能会导致蛋白信号的减弱。本Western一抗二抗去除液，经过多个抗体的检测试验，通常可以重复利用膜3-5次。

5. 因多次清洗PVDF膜可能导致蛋白信号渐弱，建议实验设计先检测表达量较低的蛋白，用去除液清洗后再次检测表达量高的蛋白，如内参蛋白等。