全血根据收集的条件，分成不抗凝和抗凝两种。不抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血清；抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血浆。血清不含有纤维蛋白原。
全血样品于室温放置1小时或2-8℃过夜后于2-8℃，1000×g离心20分钟，取上清即可检测。
真空采血针采集新鲜血液，加入无菌试管中。抗凝剂推荐使用EDTA-Na2(也可以使用绿色或紫色管盖的真空采血管)，样品采集后30分钟内于2-8℃，1000×g离心15分钟，取上清即可检测。
用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液，称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中，在冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行反复冻融或超声破碎。最后将匀浆液于2-8℃，5000×g离心5-10分钟，取上清检测。
收集液体后于2-8℃，1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。
贴壁细胞用冷的PBS轻轻清洗，然后用胰蛋白酶消化，1000×g离心5分钟后收集细胞；悬浮细胞可直接离心收集。收集的细胞用冷的PBS洗涤3次。每106个细胞中加入150-200μL PBS重悬(推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂；若含量很低可减少PBS的体积)并通过反复冻融或超声使细胞破碎。将提取液于2-8℃，1500×g离心10分钟，取上清检测。
提前1小时禁食并漱口保持口腔干净，采样前半小时不喝水不刷牙。在2-8℃下，4000×g离心10分钟以去除杂质，取上清即可检测。建议使用新鲜的唾液样本检测。
采集尿液样本，一般为早晨的中段晨尿，加入无菌试管中；将采集样本于2-8℃，1000×g离心15-20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。
将粪便以9mL/g的比例添加PBS缓冲液(0.01M, pH=7.4；可选择性添加0.05M EDTA)，冰上震荡15分钟，后于2-8℃，5000×g离心5-10分钟，取上清检测。
建议用抗凝管抗凝并静置不超过30min，于2-8℃，1000×g离心15分钟，取上清液检测。骨髓液建议抽取后直接处理并检测，不能即刻检测需将离心后的上清液冻存。骨髓是重要的造血组织，未处理的样本直接冻融后会有溶血现象，不适用ELISA检测。
组织样本：组织研磨后，将其-80℃放置1小时/液氮放置0.5小时，然后置于30℃水浴锅中轻微振荡使其迅速融化，此操作反复1-2次即可。细胞样本：按上述冻融的操作反复2-3次。若为膜蛋白可以适当超声一下，但需要控制好超声的温度和频率。样本中建议提前加入蛋白酶抑制剂。常规推荐：PMSF。
使用超声波细胞破碎器超声处理悬浮液来裂解细胞（参考：用Soniprep150超声波发生器以振幅14um超声处理30秒，破碎细胞；或者用超声破碎仪，200W，2秒/次，间隙3秒，总时间3-5分钟或者400安培，5秒/次，间隙10秒，反复3-5次）。再于2-8℃，以1500×g离心10分钟，去除细胞碎片，收集上清液。超声过程中注意控制温度。
溶血可由多种理化因素和毒素引起。在体外，如机械性强力振荡、低温冷冻等均可引起溶血。样本溶血后，内源性HRP酶以及血红蛋白的类HRP性能会导致ELISA出现不可控的非特异性着色，从而影响检测结果的准确性。如果样本轻微溶血，建议完成标准品孵育步骤后将板条洗涤1-3次再进行后续的操作，以尽可能减少影响。如果溶血严重建议重新收集样本。
为避免溶血对检测结果的感染，请：静脉采血时，回抽压力不宜过大；一次性采血量不宜过少；采集的全血不宜激烈振荡；离心转速不宜过大；收集的全血需尽快处理成血清/血浆，全血不能冻融；若需要麻醉采血，需使用没有溶血作用的麻醉剂。
一般实验用成年小鼠致死采血体积为0.8-1.2mL，理论上可以获得300-500uL血清/血浆。常规采血方法：摘眼球采血,断头采血。
一般实验用成年大鼠致死采血体积为3-8mL左右，理论上可以获得1.5-3mL血清/血浆。常规采血方法：断头采血，股动脉采血，心脏采血等。
不致死采血方法多为眼眶静脉丛采血。小鼠采血量为0.1-0.2mL，大鼠采血量为0.4-0.6mL。
试剂盒检测范围不等同于样本中待测物的浓度范围，建议实验前通过相关文献预估样本中待测物的浓度并通过预实验确定样本的实际浓度情况。如果是常规样本类型，可以咨询厂家ELISA技术支持来获取样本的推荐稀释倍数/样本量并安排预实验检测。如果样品中待测物浓度过高或过低，请对样本做适当的稀释或浓缩。如果样本中的分析物浓度远低于试剂盒的最低检测限，建议选择灵敏度更高的试剂盒来检测。
1. 血液样本采集时应尽可能避免溶血现象。
2. 收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒，充分抗凝，防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固。
3. 组织与细胞提取液样本收集时不建议使用商品化的裂解试剂，裂解液中的表面活性剂可能会影响待检物质的天然构象，可能会出现测值明显降低或者假阴性。此外，由于是新引入的溶剂，不确定基质干扰的情况，可能会造成本底升高，从而影响测值准确性。
4. 避免使用高血脂样本，高脂样本含有脂肪，不是均质溶液，若直接上样会影响抗原抗体的结合，从而影响测值准确性。
5. 样品收集后若在1周内进行检测可保存于2-8℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃或-80℃，避免反复冻融。